¿Qué son las técnicas de tinción?

Tinción: Es el proceso por el cual las moléculas de un colorante se adsorben a una superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color de las células de los microorganismos y poder realizar la observación en microscopio óptico.

Una tinción o coloración es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio.

Las tinciones se pueden clasificar como simples cuando toda la muestra se tiñe del mismo color y se utiliza un sólo colorante (azul de lactofenol o tinta china); tinción diferencial, cuando se visualiza más de un color porque se utiliza más de un colorante (Gram o Ziehl-Neelsen); tinción específica, cuando se utilizan ...

El primero, permite magnificar el tamaño y estructuras de los microorganismos para que sean visibles al ojo humano y la segunda, permiten hacer visibles a los objetos microscópicos y transparentes, revelar su forma y tamaño, así como hacer evidente la presencia de estructuras internas y externas.

La tinción requiere cuatro soluciones un colorante o tinte básico, un mordiente (sustancia que incrementa la afinidad entre la célula y el tinte), un decolorante (elimina el tinte de una célula teñida) y un segundo tinte o colorante de contraste (tinte de color diferente al inicial).

Las dos tinciones diferenciales mas utilizadas en bacteriología son la tinción de gram y la tinción de ácido-alcohol resistencia.

Tinción directa: El colorante interacciona directamente con el sustrato. Tinción indirecta: Colorante que se mezcla con un mordiente. con las estructuras celulares cargadas negativamente (como los ácidos nucleicos o los polisacáridos ácidos).

Tinciones para hongos

Tinción con azul de lactofenol. Es una tinción convencional para observar la morfología y gemación de las células.

Tipos de coloraciones

La tinción de azul de metileno Pro-Lab Diagnostics™ es una tinción lista para su uso para diferenciar los organismos no acidorresistentes de las micobacterias.

Las tinciones se pueden clasificar como simples cuando toda la muestra se tiñe del mismo color y se utiliza un sólo colorante (azul de lactofenol o tinta china); tinción diferencial, cuando se visualiza más de un color porque se utiliza más de un colorante (Gram o Ziehl-Neelsen); tinción específica, cuando se utilizan ...

La tinción con hematoxilina y eosina ayuda a identificar diferentes tipos de células y tejidos, y a obtener información importante sobre las características, la forma y la estructura celular de una muestra de tejido. Se usa para el diagnóstico de enfermedades como el cáncer.

El estudio microscópico en fresco y tras tinción revela la forma, la manera de agruparse, la estructura de las células y su tamaño. Las tinciones son el primer paso, y ocasionalmente el único, para la identificación bacteriana. Las tinciones más utilizadas e imprescindibles son la del azul de metileno y la de Gram.

Las bacterias grampositivas se clasifican por el color que adquieren después de aplicarles un proceso químico denominado tinción de Gram. Las bacterias grampositivas se tiñen de azul cuando se les aplica dicha tinción. (Otras bacterias se tiñen de rojo, son las gramnegativas).

Los ejemplos de bacterias grampositivas incluyen Streptococcus y Staphylococcus aureus, así como bacterias que causan ántrax, difteria y síndrome de shock tóxico.

Así, las bacterias que no se tiñen mediante esta técnica se denominan Gram negativas. Están formadas por una pared más fina formada por menos capas de peptidoglicano y una segunda membrana rica en lípidos (que repele la tinción Gram), al microscopio aparecen incoloras.

Tinciones y colorantes principales en microbiología

La tinción de Gram es una prueba que detecta bacterias en el lugar donde se sospecha una infección, como la garganta, los pulmones, los genitales o las lesiones en la piel. Las tinciones de Gram también se pueden usar para detectar bacterias en ciertos fluidos corporales, como la sangre o la orina.

La tinción de Gram es un tipo de tinción que se realiza sobre las bacterias para observarlas mejor bajo el microscopio. Según la distribución del peptidoglicano de la pared celular que las envuelve, se tiñen de una forma u otra.

Dentro de las tinciones diferenciales se encuentran otras, tales como tinción diferencial de Gram, tinción diferencial de Ziehl-Neelsen o tinción diferencial de Wirtz. Los colorantes más empleados en este campo son el azul de metileno, safranina y cristal violeta.

Las tinciones selectivas son aquéllas que puede evidenciar una estructura celular determinada, como aquellas bacterias que producen endosporas y/o exopolisacáridos.

En tinciones generales de hematoxilina y eosina la parte basal de la células se tiñe más intensamante debido al gran acúmulo de retículo endoplasmático rugoso y la apical de eosina por la gran cantidad de proteínas.

Para hongos y levaduras bastará, generalmente, con el objetivo de 40X, pero para las bacterias será necesario emplear el objetivo de 100X con aceite de inmersión. Son muchas las tinciones que pueden ser empleadas.

Tinción de levaduras con Azul de Metileno.

La tinción de esporas bacterianas, también llamada tinción Schaeffer-Fulton, es utilizada ampliamente para la identificación de bacterias esporuladas, generalmente pertenecientes a los géneros Bacillus y Clostridium, algunas de las cuales son patógenas por naturaleza.

El azul de metileno o cloruro de metiltioninio es un compuesto que, a dosis bajas, acelera la conversión de metahemoglobina en hemoglobina.

La Nigrosina es utilizada como una tinción ácida negativa que permite visualizar las cápsulas y esporas de muchos organismos como protozoos, hongos y espiroquetas. También ha sido descrita como agente de tinción para células viables p. ej. en la biología de las células madre.